小鼠iCD1完全诱导培养基 8.29-9.29在丁香通有6折开学促销活动。
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| iCD1小鼠iPS诱导完全培养基
5.4.2采用iCD1和少因子(OK或OS)诱导小鼠多能干细胞 图4a是在DeliCell® iCD1培养条件下,OK和OS重编程克隆的原始照片和传代照片。图4b表明OK和OS重编程获得的iPS克隆表达干细胞特异性分子标记。图4c为Oct4/KLf4和Oct4/Sox2重编程实验结果统计,表中给出了每次实验计算重编程克隆的时间和统计结果,三次试验结果表明试验具有较好的重复性。图4d为OK和OS克隆注射裸鼠长出的畸胎瘤组织切边,组织切片中明显的三个胚层的组织分化表明OK和OS克隆具备向三个胚层细胞分化的潜能。这些数据有力地证明了在iCD1培养条件下,少因子(OK或OS)能够将小鼠成纤维细胞诱导重编程。 5.4.3 采用iCD1和单因子Oct4诱导小鼠多能干细胞 MEF细胞用Oct4病毒经过两轮感染后,在iCD1中培养,连续培养30天后,将培养物用胰酶消化传代种植到饲养层细胞上,用iCD1继续培养,在传代后的第5天左右,发现有绿色重编程克隆出现,如图5a所示。通过免疫荧光检测发现这些克隆均表达多能性分子标记如Nanog,SSEA-1 和Rex1,结果如图5b所示。图5c通过实时荧光定量PCR检测多能性marker的表达状况,结果表明这些克隆表达内源Oct4、Nanog、Rex1、Dppa3、Dnmt3l的水平与标准的胚胎干细胞类似。图5d是通过实时荧光定量PCR方法分析外源基因的表达状况。OKS感染后4天的Oct4-GFP小鼠胚胎成纤维细胞作为阳性对照。结果显示挑取的这些重编程克隆,外源转录因子均已沉默。插入鉴定检测结果表明 (图5e),挑取的克隆不是因为病毒污染引起。图5f为Oct4重编程克隆细胞注射囊胚产生的嵌合体小鼠。产生的嵌合体公鼠与白色品系小鼠产下全黑色小鼠(图5g) ,该结果证明Oct4重编程克隆为生殖系嵌合。上述结果证明严格证明Oct4重编程细胞与胚胎干细胞类似,从而证明了在iCD1培养条件下,Oct4可将小鼠胚胎成纤维细胞完全重编程。 1. 培养基相关文献列表:
1. Chen, J. et al. Rational optimization of reprogramming culture conditions for the generation of induced pluripotent stem cells with ultra-high efficiency and fast kinetics. Cell research 21, 884-894 (2011). 2. Bar-Nur, O. et al. Small molecules facilitate rapid and synchronous iPSC generation. Nature methods 11, 1170-1176 (2014). 3. Buganim, Y. et al. The developmental potential of iPSCs is greatly influenced by reprogramming factor selection. Cell stem cell 15, 295-309 (2014). 4. Chen, J. et al. BMPs functionally replace Klf4 and support efficient reprogramming of mouse fibroblasts by Oct4 alone. Cell research 21, 205-212 (2011). 5. Chen, J. et al. Vitamin C modulates TET1 function during somatic cell reprogramming. Nature genetics 45, 1504-1509 (2013). 6. Papp, B. & Plath, K. Epigenetics of reprogramming to induced pluripotency. Cell 152, 1324-1343 (2013). 7. Liu, J. et al. The oncogene c-Jun impedes somatic cell reprogramming. Nature cell biology 17, 856-867 (2015). |